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Warum macht man Transfektion?
Die Transfektion führt typischerweise zur Stimulation des Proteinsynthese-Apparates der Wirtszelle unter Bildung des Genproduktes. Im eigentlichen Sinne ist der Begriff der Transfektion auf den Gentransfer durch Viren bezogen, die ihre Proteine auf diesem Weg synthetisieren lassen.
Wie funktioniert Transfektion?
Bei der viralen Transfektion werden gentechnisch veränderte, nicht mehr pathogene Viren verwendet, die das einzubringende Gen in sich tragen. Probleme sind hierbei der häufig ungerichtete, stabile Einbau in das Genom der Wirtszelle, die arbeitsintensive Herstellung der Viren sowie die starke immunologische Antwort.
Wie funktioniert mikroinjektion?
Bei der Mikroinjektion wird DNA über eine eingeführte Kanüle direkt in die Zelle oder sogar den Zellkern gespritzt. Der Vorgang wird unter dem Mikroskop beobachtet und gesteuert. Anschließend integriert sich die DNA – vermutlich im Rahmen von zelleigenen DNA-Reparaturprozessen – in das Genom der Pflanze.
Was ist eine transkriptionseinheit?
Bei Bakterien kennt man DNA-Abschnitte (Transkriptionseinheiten), von denen zunächst eine lange primäre mRNA (polycistronische RNA) gebildet wird, die abschnittsweise in verschiedene Polypeptide übersetzt wird.
Wie macht man Zellen kompetent?
Die Calciumchlorid-Methode Für das Bakterium E. coli wird in den meisten Fällen die Calciumchlorid-Methode verwendet, um kompetente Zellen zu erzeugen. Die Wirtszellen werden bei diesem Verfahren mit 0,1 molarer Calciumchlorid-Lösung behandelt.
Was sind kompetente Zellen?
kompetente Zellen, Zellen von Bakterien oder anderen Mikroorganismen, die durch besondere Methoden so vorbehandelt wurden, daß sie in Lösung befindliche freie DNA aufnehmen können (Transfektion).
Wie genau funktioniert Gentechnik?
Gentechnik bezeichnet gezielte Eingriffe in das Erbgut von Lebewesen, durch welche die DNA verändert wird. Dafür werden Gene von bestimmten Bakterien in die DNA der Pflanze übertragen. Dieses Gen macht die Pflanze resistent gegen Herbizide – so kann weiter gespritzt werden, ohne dass sich das auf die Ernte auswirkt.
Was ist eine Transfektion?
Als Transfektion bezeichnet man das Einbringen von fremder DNA oder RNA in eine Zelle, wobei es nicht zur genomischen Integration der Nukleinsäure in das Genom der Wirtszelle kommt.
Was ist eine Transformation von Bakterienzellen?
Beispiel: E.-coli-Bakterien. Damit die Bakterienzellen den Vektor aufnehmen können, muss eine Transformation durchgeführt werden. Sie kennen diesen Begriff bereits von den Experimenten, die Griffith durchgeführt hatte. Transformation steht für verändern. Durch das Einbringen des Vektors wird die Bakterienzelle verändert, also transformiert.
Was ist ein weiteres Verfahren der Transfektion?
Ein weiteres einfaches und (im Gegensatz zu anderen kommerziellen Reagentien) günstiges Verfahren der Transfektion bietet die Transfektion mittels Polyethylenimin (PEI), welches im Vergleich zur Lipofektion hohe Transfektionseffizienzen sowohl für siRNA (> 85 \%) als auch Plasmid-DNA bei niedriger Toxizität liefert.